组织中总RNA的提取↓利用反转录酶合成cDNA↓PCR反应：反应液组织：反应缓冲液模板（上述合成的cDNA）底物（dATP,dGT
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核酸杂交是从核酸分子混合液中检测特定大小的核酸分子的传统方法。其原理是核酸变性和复性理论。即双链的核酸分子在某些理化因素作用下双链
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（一）细菌培养物的生长从琼脂平板上挑取一个单菌落，接种到培养物中(有含有行当抗生素的液体培养基中生长)，然后从中纯化质粒，质粒的提
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增加PCR的特异性：1.primersdesign这是最重要的一步。理想的，只同目的序列两侧的单一序列而非其他序列退火的引物要符合
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pcr产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带pcr反应
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DNA经过限制性内切酶消化和凝胶电泳后，放入碱性溶液中使其变性，将变性后的单链DNA从凝胶中按原来位置和顺序用滤纸吸印转移到硝酸纤
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在RNA凝胶电泳之前，先用乙二醛等变性剂处理RNA，再在适宜条件下电泳使充分变性的RNA直接吸印到硝酸纤维膜上。固定后除去变性剂，
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1.体细胞杂交法 体细胞是生物体除生殖细胞外的所有细胞。将从身体分离的体细胞做组织培养进行遗传学研究的学科称为体细胞遗传学（som
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1 质粒DNA的提取质粒DNA是细菌细胞中小的共价闭合环状双链DNA。由于基因工程中使用的载体主要是质粒，因此，质粒DNA的提取和
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采用RNA变性电泳法检测RNA质量,方法如下：⑴ 凝胶制备：制备1.2%琼脂糖凝胶（电泳槽体积为50ml）① 称取0.6g琼脂糖，
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通过体外无细胞系统翻译找出目的基因mRNA以后，变可进行cDNA第一链的合成，其步骤包括：1）在Ependorf管中加50pmol
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1.DNA的变性解链是杂交成功的关键,Southern印迹杂交时DNA在凝胶中变性,变性方法是将凝胶浸在数倍体积的1.5mol/L
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菌落原位杂交（colony in situ hybridization）。是将细菌从一主平板转移到硝酸纤维素滤膜上，然后将滤膜上的
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斑点杂交（Dot blot）是将被检标本点到膜上，烘烤固定。这种方法耗时短，可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品，为使点样准
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Southern印迹杂交（Southern blot）是研究DNA图谱的基本技术，在遗传病诊断、DNA图谱分析及PCR产物分析等方
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Northern印迹杂交（Northern blot）。这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。DNA印迹技术由
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1）膜的处理：同DNA的打点法。2）RNA变性：将提取的RNA与50μl 20×SSC/甲醛（30μl 20×SSC加20μl甲醛
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Southern杂交可用来检测经限制性内切酶切割后的DNA片段中是否存在与探针同源的序列,它包括下列步骤：(1) 酶切DNA, 凝
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1、常规脱蜡浸入0.01mol/LPBS；2、用0.2mol/L盐酸处理5min；3、蛋白酶K(25μg/m1)消化37℃ 15m
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一、材料基因组DNA(大于50kb,分别来自不同的材料)。二、设备电泳仪及电泳槽，照相用塑料盆5只，玻璃或塑料板(比胶块略大) 4
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